本次會(huì )議授課專(zhuān)家蕓集，在實(shí)驗室能力建設方面主題論壇中， 北京大學(xué)基礎醫學(xué)院魯鳳民教授做了《從pgRNA病毒樣顆粒的產(chǎn)生看HBV新標識血清RNA的臨床應用》主題報告，報告以“我國慢性乙型肝炎患者診治的成就與挑戰”內容展開(kāi)，乙型肝炎病毒的發(fā)現、病毒學(xué)特征；乙型肝炎病毒感染后的階段性疾病進(jìn)展及結局；HBV 的感染復制周期及核苷（酸）類(lèi)藥物（NAs）抗病毒治療的靶點(diǎn)；在接受NA治療的患者中，HCC發(fā)生風(fēng)險僅降低~50%, 并未完全消除；新版指南（2022）擴大抗病毒治療后，我國92%的慢性感染者將得到治療；臨床治愈可顯著(zhù)改善慢性乙肝患者（慢性HBV感染者、HBV相關(guān)肝癌患者）遠期不良結局；我們處在核苷（酸）類(lèi)藥物為主要治療藥物的抗病毒時(shí)代，獲得完全病毒學(xué)應答的患者，仍有較高的HCC發(fā)生風(fēng)險。

關(guān)于HBV RBA病毒樣顆粒的發(fā)現、血清HBV RNA的產(chǎn)生路徑、存在形式、來(lái)源和特點(diǎn)等做了詳細闡述，同時(shí)分享國內肝病領(lǐng)域張文宏研究團隊等工作成果，血清HBV RNA水平反映肝內cccDNA的轉錄活性，血清 HBV pgRNA，是NA治療下HBV DNA ＜ LLOQ后，能夠反映患者肝組織內是否有cccDNA活躍轉錄的唯一指標。

鑒于當下“核苷（酸）類(lèi)藥物抗病毒時(shí)代，亟需新的血清病毒標志物”背景，魯鳳民教授在報告中著(zhù)重指出，NA治療下患者血清HBV DNA消失后，血清pgRNA檢測可反映cccDNA的轉錄活性，cccDNA的存在是乙肝感染持續、停藥后復發(fā)及慢性乙肝難以治愈的主要原因。 cccDNA以微小染色體形式存在于感染肝細胞核內，結構穩定難以清除，而肝組織cccDNA的檢測需要有創(chuàng )的肝穿刺活檢，病人接受度不高，無(wú)法廣泛開(kāi)展，因此臨床亟需能夠反映肝組織內cccDNA存在及轉錄活性度血液替代指標。

當前常用的病毒學(xué)指標HBsAg的來(lái)源除了cccDNA以外還有整合HBV DNA片段，只有3.5kb超基因組長(cháng)度的preC mRNA和pgRNA僅可轉錄自cccDNA，因而能反映cccDNA的指標為pgRNA和HBcrAg。

對于新標志物血清HBV RNA的臨床應用，需明確兩個(gè)重要問(wèn)題，一是為何要用，二是如何用。關(guān)于此部分內容，魯鳳民教授做了深入詳致的分享闡述。

新標志物血清HBV RNA為何要用？

我們?yōu)楹我繖z測血清中的HBV DNA？反映慢性感染和源自cccDNA的病毒DNA復制是否活躍；NA治療下源自cccDNA的pgRNA逆轉錄合成子代病毒DNA的過(guò)程是否被抑制；NA治療下DNA合成被完全抑制，即患者血清HBV DNA＜LLOQ，但不等于cccDNA的消失，如何監測？

因而我們需要新型標志物HBV RNA，在NA治療下患者血清HBV DNA檢測不到后，通過(guò)HBV RNA檢測反映cccDNA轉錄活性。

另外，鑒于血清HBV RNA的存在形式 ---慢性HBV感染者血清中的HBV RNA很復雜，既來(lái)自病毒復制過(guò)程(cccDNA)，也來(lái)自整合 HBV DNA的轉錄，魯鳳民教授分享指出應排除干擾建立最靈敏的檢測技術(shù)。魯教授團隊已發(fā)表“標準化血清HBV RNA檢測方法的建立”研究成果，且中國食品藥品檢定研究院已經(jīng)研制出“乙型肝炎病毒RNA 檢測試劑國家標準品”，適用于HBV RNA 定量檢測試劑盒的質(zhì)量評價(jià)。血清HBV RNA檢測的溯源與標準化，以確保檢測試劑的質(zhì)量及不同試劑可比性。

作為新指標應用臨床關(guān)切的重點(diǎn)內容，魯鳳民教授在報告中提出HBV RNA三大應用場(chǎng)景。

場(chǎng)景2--- DNA轉陰后，HBV RNA可持續提示療效。

★ HBV DNA陰性患者中，RNA仍有相當比例陽(yáng)性，且隨治療時(shí)間逐步轉陰。

★ 用于低病毒血癥及DNA陰性患者抗病毒療效監測；HBV RNA可填補HBV DNA監測盲區，HBV DNA轉陰后可持續提示療效，HBV RNA持續陽(yáng)性，提示治療效果欠佳。

場(chǎng)景3--- 血清HBV RNA預測NA 治療患者的肝細胞癌發(fā)生風(fēng)險。

★ 血清HBV RNA水平與CHB患者肝臟炎癥活動(dòng)度和肝纖維化分期均相關(guān)。

★ NA治療下的持續血清HBV RNA陽(yáng)性與HCC進(jìn)展相關(guān)，RNA陽(yáng)性或較高水平，HCC累積復發(fā)率越高，總生存率越低。

報告最后，魯鳳民教授對血清HBV RNA 定量檢測當前存在的問(wèn)題與展望進(jìn)行了總結。

檢測方面：血清HBV RNA 定量檢測的下限（靈敏度）有待進(jìn)一步提高；尚無(wú)國際標準品，血清HBV RNA 定量的量值溯源及國際標準化是亟待解決的問(wèn)題。

臨床應用方面：指導安全停藥；NA治療下患者血清HBV RNA檢測陽(yáng)性預示更高的HCC發(fā)生風(fēng)險；NA治療下患者血清HBV RNA檢測陽(yáng)性，提示病毒cccDNA仍在有效轉錄表達病毒蛋白、組裝子代病毒顆粒樣pgRNA病毒顆粒。

衛生經(jīng)濟學(xué)方面：在充分發(fā)揮其診斷和療效評估價(jià)值的同時(shí)，最大限度降低患者和社會(huì )的經(jīng)濟負擔。

PS：北京大學(xué)擁有血清HBV RNA定量檢測（熒光探針?lè )ǎ?zhuān)利，通過(guò)北京大學(xué)專(zhuān)利實(shí)施許可，與北京熱景生物聯(lián)合研發(fā)的國際上首個(gè)乙肝病毒前基因組RNA熒光定量檢測試劑盒已上市。